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CCK8试剂盒

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品牌
Goyoo
规格
500次
规格
  1. 24T
  2. 50T
  3. 96T
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  • 沈阳莫德医药科技有限公司

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  • 产品说明

    目录号
    名称
    规格
    包装
    价格
    GY025-100次
    Cell   Counting Kit
    100   次
    1ml
    180
    GY025-500次
    Cell   Counting Kit
    500   次
    5ml
    575
    GY025-1000次
    Cell   Counting Kit
    1000   次
    10ml
    900
    GY025-3000次
    Cell   Counting Kit
    3000   次
    30ml
    1800


    产品简介:

    Cell Counting Kit简称 

    CCK 试剂盒,为MTT法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。


    CCK法与其它检测方法之间的比较:

    细胞计数方法

    MTT法

    XTT法

    WST-1法

    CCK法

    形成的formazan的水溶性

    产品性状

    粉末

    2瓶溶液

    溶液

    1瓶溶液

    使用方法

    配成溶液后使用

    现配现用

    无需预制

    无需预制

    检测灵敏度

    很高

    很高

    检测时间

    较长

    较短

    较短

    最短

    检测波长

    560-600nm

    420-480nm

    420-480nm

    430-490nm

    细胞毒性

    高,细胞形态完全消失

    很低,细胞形态不变

    很低,细胞形态不变

    很低,细胞形态不变

    试剂稳定性

    一般

    较差

    一般

    很好

    大批量样品检测

    可以

    非常适合

    非常适合

    非常适合

    便捷程度

    一般

    便捷

    便捷

    非常便捷

     

    CCK用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验


    操作说明:

    一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

    1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

    2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。

    3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),  OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要  一致,便于确定细胞的接种数量以及万博官方manbetx下载CCK后的培养时间。)


    二、细胞活性检测

    1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

    2、向每孔万博官方manbetx下载10 μL的CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

    3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

    4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

    5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中万博官方manbetx下载10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。


    三、细胞增值-毒性检测

    1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5% CO2的条件下)。

    2、向培养板万博官方manbetx下载10μL不同浓度的待测物质。

    3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

    4、向每孔万博官方manbetx下载10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

    5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

    6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

    7、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中万博官方manbetx下载10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

    注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后万博官方manbetx下载新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中万博官方manbetx下载药物后的空白吸收即可。

     备注:

     ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和万博官方manbetx下载CCK试剂后的培养时间。
     ②有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。万博官方manbetx下载CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基
    页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

     ③白细胞可能需要培养较长时间。
     ④当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推
    荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%万博官方manbetx下载CCK溶液。

     ⑤如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。                              

     ⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。


    活力计算:

    细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
    A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
    A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
    A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
    *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力   

    1.一个孔中应接种多少个细胞当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%万博官方manbetx下载CCK-8溶液。


    保存条件:4℃干燥避光保存,有效期一年。


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