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人食管癌细胞

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  • 赛百慷(上海)生物技术股份有限公司

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  • 产品说明

    细胞特性
    1) 来源:食管癌
    2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
    3) 含量:>1x106 个/mL
    4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
    5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
     

    运输和保存

    可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

    (1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

    (2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

    (3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
     
    细胞用途:仅供科研使用。
    细胞接受后的处理:
    1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
    2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
    3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的完全培养基。
    4) 如果细胞长满(80%-90%)请及时进行细胞传代。
    5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
                           
    细胞培养步骤
    一.培养基及培养冻存条件准备:
    1) 准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
    2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
    3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
    二. 细胞处理:
    1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,万博官方manbetx下载4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液万博官方manbetx下载培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液万博官方manbetx下载250px皿中,万博官方manbetx下载约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
    2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
    对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
    1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
    下面T25瓶为例;
    1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后万博官方manbetx下载1ml胰酶,细胞变圆脱落后,万博官方manbetx下载2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
    2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。万博官方manbetx下载DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
    3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。


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